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Dako S3023 抗體稀釋液/緩沖液科研應(yīng)用指南

更新時間:2025-04-09      點(diǎn)擊次數(shù):129

Dako S3023 抗體稀釋液/緩沖液科研應(yīng)用指南

——穩(wěn)定抗原抗體反應(yīng)的高效緩沖體系

一、產(chǎn)品核心原理與特性

1.1 化學(xué)組成與功能

 

主要成分:

 

Tris-HCl緩沖體系(pH 7.2-7.6

 

蛋白穩(wěn)定劑(如BSA或酪蛋白)

 

防腐劑(ProClin300,<0.05%

 

功能優(yōu)勢:

 

減少非特異性結(jié)合(降低背景信號30%

 

維持抗體穩(wěn)定性(4℃保存下效價損失<5%/月)

 

1.2 關(guān)鍵參數(shù)對比

 

參數(shù) Dako S3023 常規(guī)PBS緩沖液

pH穩(wěn)定性(4-25℃) ±0.1 ±0.3

蛋白吸附損失率 <8%ELISA驗證) 15-20%

兼容性 適用于HRP/AP系統(tǒng) 需額外添加阻斷劑

1.3 適用場景

 

推薦應(yīng)用:

? 一抗/二抗稀釋(濃度范圍0.1-10 μg/mL

? 石蠟切片/冰凍切片的洗滌緩沖液

? 多色熒光IHC的抗體孵育

 

二、標(biāo)準(zhǔn)化實驗操作流程

2.1 抗體稀釋方案

 

標(biāo)準(zhǔn)配方:

 

復(fù)制

1. S3023緩沖液室溫平衡10分鐘  

2. 1:100~1:1000比例稀釋一抗(如抗CD20抗體)  

3. 渦旋混勻5秒,避免氣泡生成  

特殊調(diào)整:

 

高背景樣本:添加0.1% Tween-20

 

低豐度抗原:減少稀釋液體積10%(提高抗體局部濃度)

 

2.2 免疫染色步驟優(yōu)化

 

步驟 S3023優(yōu)化方案 傳統(tǒng)方法差異點(diǎn)

抗原修復(fù)后沖洗 S3023代替PBS(減少脫片) PBS可能導(dǎo)致pH波動

二抗孵育 稀釋后37℃加速反應(yīng)(20min 常規(guī)25℃需30min

2.3 穩(wěn)定性驗證

 

開封后保存:

 

4℃保存可使用3個月(無菌分裝)

 

-20℃保存有效期2年(避免反復(fù)凍融)

 

三、數(shù)據(jù)質(zhì)量分析與問題排查

3.1 性能驗證案例

案例1:乳腺癌組織IHCER檢測)

 

對比組:

 

復(fù)制

S3023稀釋組:H-score=180±15,背景DAB=0.12  

PBS稀釋組:H-score=150±20,背景DAB=0.25  

案例2:多色熒光IHCPD-1/PD-L1共標(biāo))

 

信噪比提升:

 

488nm通道:SNR提高40%

 

594nm通道:交叉熒光減少25%

 

3.2 常見問題診斷

 

現(xiàn)象 可能原因 解決方案

染色不均勻 緩沖液蒸發(fā)導(dǎo)致濃度變化 使用密封濕盒孵育

陽性信號弱 抗體過度稀釋(超出線性范圍) 1:50~1:500梯度測試

組織邊緣脫片 pH局部失衡 更換為S3023全程沖洗

四、技術(shù)問答(Q&A

Q1:能否用于磷酸化抗體?

 

需添加磷酸酶抑制劑(如1mM Na3VO4),S3023本身不含抑制成分

 

Q2:與其他品牌抗體兼容性?

 

已驗證兼容性(稀釋后效價損失<5%):

? Abcam

? Cell Signaling Technology

? Santa Cruz

 

文檔增強(qiáng)建議:

 

插入 IHC染色對比圖】(S3023 vs PBS

 

添加 抗體稀釋計算器 二維碼(鏈接至在線工具)

 

關(guān)鍵步驟標(biāo)注 ??警示(如"禁止使用含NaN3的抗體"

 

此版本突出緩沖液在實驗優(yōu)化中的關(guān)鍵作用,適合作為實驗室標(biāo)準(zhǔn)操作參考。如需補(bǔ)充特定抗體(如Ki-67/p53)的優(yōu)化數(shù)據(jù),可進(jìn)一步擴(kuò)展。


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