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細胞培養(yǎng)長期研究中,TrypLE Express酶的使用注意事項有哪些?

更新時間:2025-08-16      點擊次數(shù):163
在細胞長期培養(yǎng)中,細胞類型的差異致使細胞的生長特性、表面結(jié)構(gòu)、對外部環(huán)境的耐受性等方面存在不同,這使得 TrypLE Express 酶在作用于不同細胞時,效果會出現(xiàn)明顯區(qū)別。


  1. 細胞系

    • 貼壁細胞系:像中國倉鼠卵巢細胞(CHO)、人胚腎 293 細胞(HEK 293)這類常見的貼壁細胞系,通常貼壁較為緊密。TrypLE Express 酶能夠特異性地裂解賴氨酸和精氨酸 C - 末端的肽鍵,有效解離細胞與培養(yǎng)皿表面的連接。在長期培養(yǎng)中,該酶溫和的作用特性不會對細胞表面標志物造成明顯破壞,例如多次傳代后,HEK 293 細胞表面的相關(guān)抗原標志物表達依然穩(wěn)定,細胞形態(tài)和生長速率也能保持相對穩(wěn)定,保證了實驗的連續(xù)性和結(jié)果的可靠性。不過,由于不同貼壁細胞系貼壁強度存在差異,在使用 TrypLE Express 酶時,需要針對具體細胞系摸索合適的作用時間和濃度,以達到最佳解離效果 。

    • 懸浮細胞系:對于懸浮生長的細胞系,如 Jurkat 細胞,雖然不存在貼壁解離的問題,但在細胞傳代、分選等操作中也會用到 TrypLE Express 酶。研究表明,相較于傳統(tǒng)胰蛋白酶,TrypLE Express 酶處理 Jurkat 細胞后,細胞表面 CD2 等標志物無明顯損失,細胞活力和功能得以較好維持。在長期培養(yǎng)過程中,能夠減少對細胞生長和代謝的影響,使細胞保持良好的增殖狀態(tài),為后續(xù)的細胞功能研究、藥物篩選等實驗提供穩(wěn)定的細胞來源 。

  2. 原代細胞

    • 原代人角質(zhì)化細胞:原代細胞對外部環(huán)境變化較為敏感,TrypLE Express 酶非動物源性的特點為其提供了更安全的解離環(huán)境,避免了傳統(tǒng)動物源性酶可能引入的病原體風險。在原代人角質(zhì)化細胞的長期培養(yǎng)中,使用該酶能夠在保證細胞解離效果的同時,減少對細胞的損傷,維持細胞的正常生理功能。細胞可以保持良好的分化特性,細胞間的連接結(jié)構(gòu)和細胞表面的特異性蛋白表達相對穩(wěn)定,有助于深入研究角質(zhì)化細胞的生物學特性和相關(guān)疾病機制 。

    • 原代神經(jīng)元細胞:神經(jīng)元細胞較為脆弱,對酶的作用更為敏感。TrypLE Express 酶成分均一、純度高的特性,使其在解離原代神經(jīng)元細胞時,能將對細胞的損害降到。在長期培養(yǎng)中,可較好地保留神經(jīng)元細胞的突觸結(jié)構(gòu)和電生理特性,細胞的存活時間和功能維持時間顯著延長,為神經(jīng)系統(tǒng)疾病研究、神經(jīng)再生研究等提供了更優(yōu)質(zhì)的細胞模型 。

  3. 干細胞

    • 胚胎干細胞:胚胎干細胞具有自我更新和多向分化潛能,在其長期培養(yǎng)過程中,對細胞狀態(tài)的維持要求。TrypLE Express 酶溫和的作用方式不會影響胚胎干細胞的這些特性,多次傳代后,細胞依然能夠保持較高的干性,細胞表面的干性標志物如 Oct4、Sox2 等表達穩(wěn)定。這使得科研人員能夠利用該酶進行胚胎干細胞的傳代、擴增和誘導分化等操作,為干細胞治療、發(fā)育生物學研究等領(lǐng)域提供可靠的細胞資源 。

    • 誘導多能干細胞(iPSCs):iPSCs 同樣需要在培養(yǎng)過程中維持良好的細胞狀態(tài)。TrypLE Express 酶在 iPSCs 的長期培養(yǎng)中,既能實現(xiàn)高效的細胞解離,又不會對細胞的重編程狀態(tài)和分化能力產(chǎn)生明顯影響。細胞可以穩(wěn)定地進行傳代,且在誘導分化為不同細胞類型時,能夠保持正常的分化潛能和效率,有助于推動 iPSCs 在疾病建模、藥物研發(fā)等方面的應用 。



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